Estudio de los microorganismos

 

Para el estudio de microorganismos se requiere el llamado cultivo, una población microbiana en crecimiento que necesita un medio con nutrientes precisos y temperatura y pH óptimos.
El cultivo ha de estar formado por individuos genéticamente homogéneos por lo que hay que someter la muestra a métodos de aislamiento, para separar una especie microbiana de las otras. Para identificar los microorganismos, estos deben ser manipulados en condiciones de asepsia (ausencia de microorganismos patógenos) y cada material empleado ha de ser esterilizado para evitar la contaminación.

 

      MEDIOS DE CULTIVO
 
Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energía y elementos químicos para la síntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en autotrofos si es el CO2 atmosférico (microorganismos que fotosintetizan) y heterotrofos si utilizan carbono orgánico. 
 
Además, en ciertos casos, es necesario añadir a los medios de cultivo algunos aminoácidos o vitaminas que determinados tipos de microorganismos no pueden sintetizar.
 
Los medios de cultivo se pueden clasificar en sintéticos cuando su composición química se conoce totalmente y complejos cuando no es el caso porque están compuestos por mezclas de extractos de materiales complejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.).
Por otra parte, los medios de cultivo pueden ser líquidos o sólidos si se añade algún agente solidificante que no sea consumible por los microorganismos (normalmente agar).
En función de los microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser generales, selectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras suprimen el de otros (por ejemplo, el medio SPS para clostridios), diferenciales cuando alguno de sus componentes permite identificar las colonias de un tipo de microorganismos (por ejemplo medios con hematíes para identificar colonias de microorganismos hemolíticos), selectivo-diferenciales cuando combinan las dos características anteriores (por ejemplo, el agar de MacConkey para identificar Escherichia coli), y medios de enriquecimiento que permiten aislar un tipo determinado de microorganismo a partir de una mezcla una población mixta de gran tamaño.
 
      MÉTODOS DE AISLAMIENTO
 
Se basan en una reducción progresiva del número de microorganismos de la muestra inicial. Tras esto, los gérmenes obtenidos en un medio de cultivo, se transfieren a otro. Tipos:
 
   - Aislamiento por agotamiento de asa en superficie:
www.youtube.com/watch?v=eNz0FE9Q-BA
 
   - Aislamiento por dilución y siembra en profundidad:
 
   - Aislamiento directo: consiste en preparar la muestra en una placa de Petri, colocarla en un microscopio y con ayuda de una pipeta Pasteur, aislar los microorganismos. Solo aquellos de mayor tamaño como algas  y protozoos
 
 
     MÉTODOS DE ESTERILAZIÓN
 

Consiste en eliminar los microorganismos de un medio de cultivo, alimento o material de laboratorio.
Los métodos utilizados normalmente son:

- Calor: es el agente letal más utilizado. Se emplea o bien el horno de Pasteur que esteriliza en seco a temperaturas de 200°C aprox., o bien el autoclave, que es un recipiente metálico que esteriliza por calor húmedo a temperaturas de 120°C.
- Filtración: se emplea a sustancias que pueden ser destruidas a altas temperaturas, consiste en separar microorganismos que quedan retenidos en los poros del filtro de la solución que los contiene, la cual atraviesa el filtro.
- Radiaciones: ultravioleta, gamma e ionizantes que alteran las moléculas de ácido nucleico de las células.

 

MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN

 

La identificación de los microorganismos requiere:
- Estudios de microscopía: para identificarlos por la forma celular o de las colonias, presencia de esporas... Las tinciones diferenciales permiten separar a las bacterias en dos grupos, las Gram positivas y las Gram negativas.
- Métodos bioquímicos: estos utilizan placas de identificación, son rectangulares y están dotadas de pequeñas cubetas donde se alojan sustratos con sus indicadores. Después, la muestra se hace reaccionar con todas produciéndose un código de colores que es exclusivo para cada microorganismo.
- Técnicas de la biología molecular: se basan en el conocimiento de secuencias concretas del genoma de los microorganismos, que hibridan con sondas de ADN (fragmentos de ADN complementarios de una de las hebras del genoma del microrganismo problema). Si el patógeno está presente en la muestra, se forma una molécula híbrida